Laboratoires AGROBIO 2011

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Dosage des polyphénols

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Polyphénols

Extractions des polyphénols

Milieux d'extraction
  • Matières premières : les sources végétales
  • Ingrédients (extraits végétaux)
  • Milieux biologiques : plasma, urines
  • Produits finis : différentes formes galéniques
  • Modes d’extractionExtraction aux solvants

    Matières premières :

    L’objectif de cette extraction est de libérer les polyphénols présents dans des structures vacuolaires par rupture du tissu végétal et par diffusion.

    Préparation des échantillons : certains polyphénols sont instables, se dégradent (oxydation) par action enzymatique, il est prudent d’incorporer un antioxydant (BHT, Vit C…)

    Délipidation pour les matières riches en lipides

    Extraction aux solvants

    Facteurs influençant l’efficacité de l’extraction aux solvants:

  • Nature du solvant: eau, méthanol, acétonitrile, acétone, acétate d’éthyle.
  • Le pH du milieu d’extraction : détermine le degré de solubilité des substances solubles
  • La température : 25-55°C
  • Le nombre d’extractions et le volume du solvant utilisé
  • La taille et la forme des particules : produit bien homogénéisé
  •  

    Extraction Phase-solide (SPE)

    Technique pour fractionner/purifier ou encore pour pré-concentrer des composés présents dans des matrices liquides.

    Exemples de phases solides :
  • C18 pour extraire les acides phénoliques, flavonoïdes
  • Amberlite (échangeuse d’ions) elle est utilisé pour éliminer les composés polaires non phénoliques des extraits riches en anthocyanins
  • Polyvynilpyrrolidone (polyclar AT) sont utilisés pour séparer les anthocyanins
  • PVPP pour éliminer les sucres et acides.

    On utilise un solvant (méthanol, éthanol) pour décrocher les polyphénols fixés sur le support.

  •  

    Extraction Supercritique (SFE)

    Le CO2 supercritique est très utilisé comme solvant d’extraction.

  • Sa faible viscosité lui confère une grande capacité de diffusion lui permettant d’avoir accès à des composés phénoliques liés à la paroi cellulaire.
  • sa densité relativement élevé lui confère un pouvoir de solvatation élevé lui permettant ainsi un meilleur taux d’extraction

  • Procédé non dénaturant : minimise les phénomènes d’oxydation ou isomérisation
  • Temps d’extraction réduit
  •  

    Techniques de filtration membranaire

    MicroF, UF et NanoF utilisées pour fractionner et concentrer les composés phénoliques.

  • la microF permet la délipidation
  • la microfiltration pour dessaler……
  • Procédés physiques

  • peu dénaturants
  • non polluants
  •  

    Pour les extraits végétaux et produits finis les techniques d’extraction sont identiques à celles utilisées pour l’extraction des matières premières

    Une validation de la technique d’extraction doit être effectuée sur chaque nouvelle matrice : évaluation de la répétabilité, reproductibilité et justesse de la méthode.

    Milieux biologiques

    Dans les tissus mammaliens les polyphénols sont habituellement présents sous formes conjugués ( bêta glucuronides et sulfates)

    Une hydrolyse enzymatique, à l’aide d’un mélange enzymatique, est nécessaire avant l’extraction des polyphénols

     

    Analyse des polyphénols

    Dosage des polyphénols totaux par spectrophotométrie

  • Méthode de Folin (méthode non spécifique)

    Dosage des polyphénols par méthode HPLC

      • séparation sur colonne phase inverse (C18)
      • détection à l’aide de :
      • spéctro UV (préférentiellement un barrette de diode)
      • CoulArray (détection coulométrique)

    Caractérisation des polyphénols

  • HPLC- MS et RMN
  • Extrait de thé vert : barrette de diode OPC de pépins de raisins
    Dosage des Prenilflavonoïdes du houblon par HPLC dosage des Isoflavones par HPLC
    Dosage de l'EQUOL par HPLC (par coulométrie) Production spectrum of genistein glucoronide in EIS-MS/MS
    Dosage des Polyphénols et alcaloïdesde cacao par HPLC Dosage des lignanes (SDG) de lin par HPLC